篇1
1 材料与方法
1.1 实验材料及试剂
人骨骼肌细胞株（HSKMC）从中国科学院昆明细胞所购买。流式细胞仪购自BD公司，Fluo-3 AM钙离子荧光探针试剂盒购自invitrogen公司，Olympus荧光显微镜，细胞周期与凋亡检测试剂盒购自武汉碧云天公司。
1.2 方法
1.2.1 HSKMC细胞培养 HSKMC细胞复苏后，将细胞收入离心管中，1000 r/min离心10 min，弃上清，用高糖DMEM培养液（含20%胎牛血清，10 0000 U/L青霉素、100 mg/L链霉素）混匀细胞，转入25 mL玻璃培养瓶中，在37 ℃、5% CO2浓度及饱和湿度条件下培养，次日换液，以后根据细胞生长情况每48～72 h更换培养液一次，每周传代1～2次。 [选自《中华急诊医学杂志》2014年第8期,专业提供写作论文服务，欢迎光临.]
1.2.2 流式细胞仪钙离子内流检测热打击对HSKMC细胞膜通透性的影响 将Fluo-3AM钙离子荧光探针溶于1 mL DMSO中，制成1 μg/μL，取对数生长期细胞，按1×104个/皿密度铺入60 mm×15 mm细胞培养皿，培养至单层融合后，给予消化，然后将悬浮液按下述方法给予刺激：①对照组（即将细胞置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱中同其余各组等时间培养）；②43 ℃热打击组（将细胞置于43 ℃细胞培养箱中培养1 h）。打击后同一时间每瓶悬浮液按2 μL/100 μL加入Fluo-3AM钙离子荧光探针，置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱共同避光孵育1 h，予以上机检测。
1.2.3 考马斯亮蓝R-250染色法检测热打击对HSKMC细胞骨架影响 取对数生长期细胞，消化后按5×103个/片密度铺入6孔板培养玻片，培养至单层融合后，按下述方法给予刺激：①对照组（即将细胞置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱中同其余各组等时间培养）；②43 ℃热打击组（将细胞置于43 ℃细胞培养箱中培养1 h）。应用考马斯亮蓝R250染色：①配制M-缓冲液；②倾弃培养上清，加入1 mL PBS冲洗3次；③吸去PBS，用1.5%TritonX-100摇床震荡处理8 min，3次；④吸去TritonX-100，用M-缓冲液摇床震荡洗4次，每次3 min；⑤用3%戊二醛固定10 min，给予M-缓冲液洗3次，每次3 min；⑥用0.2%考马斯亮蓝R250震荡染色40 min；⑦蒸馏水洗3次，每次孵箱烘干；⑧然后将细胞玻片置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察；⑨如染色效果好，可用二甲苯处理样品，5 min，两次，最后一次不要等样品干；⑩加一滴中性树胶，加盖玻片封片，制成永久切片。普通光学显微镜高倍镜下照片。
1.2.4 流式细胞仪检测热打击对HSKMC细胞周期改变 取对数生长期细胞，按1×104个/皿密度铺入60 mm×15 mm细胞培养皿，培养至单层融合，按下述方法给予刺激：①对照组（即将细胞置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱中同其余各组等时间培养）；②43 ℃热打击组（将细胞置于43 ℃细胞培养箱中培养1 h）。将43 ℃热打击组继续置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱孵育，于0、6、18、24 h分别取出后消化，用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。具体操作按武汉碧云天公司细胞周期与凋亡检测试剂盒说明书进行。染色完成后在24 h内完成流式检测。用流式细胞仪在激发波长488 nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。
2 结果
2.1 热打击对HSKMC细胞膜通透性的影响
流式细胞仪检测结果提示，给予培养人HSKMC细胞不同温度梯度热打击1 h后，如图1所示，43 ℃热打击组钙离子流式检测的中位数为91.63，37 ℃对照组中位数为22.98。
2.2 热打击对HSKMC细胞骨架影响
本实验中，同对照组相比，随着热打击程度加强，显微镜高倍镜下可见骨骼肌细胞骨架逐渐出现变粗、变短、出现明显的应力纤维，见图2。
2.3 热打击对HSKMC细胞细胞周期改变
同正常对照组相比，骨骼肌细胞在热打击情况下，DNA含量与细胞周期中各期百分构成比统计结果分别见图3及表1。3 讨论
胞浆Ca2+是细胞的第2信使。细胞内钙不仅作为一种重要的第2信使广泛参与细胞的运动、分泌、代谢和分化等多种细胞功能活动的调节，而且胞内钙离子浓度的变化与调控对于参与维持存在于细胞质膜或细胞器膜两侧的跨膜梯度差，以及介导细胞对外界刺激的应答反应具有重要的调节作用[13]。研究发现， 钙在细胞损伤过程中起重要作用，各种因素导致的细胞或细胞器内钙过度集聚可引起细胞结构和功能损害，线粒体和细胞内钙异常增加程度常作为细胞损伤指征之一[14]。
引起横纹肌溶解的一个重要的理论就是线粒体Ca2+超载导致线粒体功能障碍[15]。细胞内外的Ca2+水平变化是微小和迅速的，极难测定，目前定量这些变化在技术上仍存在一定困难[16]。通过测定荧光强度来反映细胞中的钙离子浓度是目前普遍采用的细胞内钙离子检测方法。本实验通过应用流式细胞仪及Fluo-3/AM检测不同温度热打击后细胞内钙离子变化。本实验结果显示，Fluo-3/AM负载的HSKMC细胞在37 ℃基础状态下就有少量钙离子内流，但随着热打击温度及时间延长，43 ℃热打击组钙离子流式检测的中位值为91.63，而37 ℃对照组中位值仅为22.98，提示细胞内钙离子浓度明显增加，说明在热打击的情况下造成细胞钙离子内流效应，导致细胞内钙超载，最终导致骨骼肌细胞损伤、坏死。
细胞骨架是细胞内不同蛋 白质纤维的聚合物和各种调控蛋白交错连接的网络结构，它参与细胞分裂及运动、细胞内物质运输等多种功能，在维持真核细胞的形态、承受外力、胞内运输、变形运动、信号转导等方面发挥着重要的作用，而且还参与许多重要的生命活动，包括染色体分离、细胞中各类小泡和细胞器的定向转运以及白细胞迁移、游动、神经细胞轴突伸展等[17-18]。一般而言，应力纤维是支撑细胞形态的主要结构，其表达的改变往往代表细胞的变形和增殖等变化[19]。本实验通过应用考马斯亮蓝R250染色法检测热打击对HSKMC细胞骨架影响，随着热打击时间及程度加强，同对照组相比，显微镜高倍镜下可见HSKMC细胞骨架逐渐出现变粗、变短，出现明显的应力纤维。提示热打击可改变HSKMC骨架结构，增加HSKMC通透性，同时使骨架失去正常的网状有序排列结构，引起细胞收缩，使HSKMC间隙增大，最终会导致HSKMC结构和功能出现改变。
多细胞有机体的发生与发育有赖于细胞增殖、分化和死亡的精密结合， 即细胞周期的正常运行。本研究通过流式细胞仪检测热打击后骨骼肌细胞细胞周期分布，发现骨骼肌细胞在热打击情况下，各组G0/G1期DNA相对含量在44.13～62.98之间，与正常对照组对比，当细胞离开热打击环境后培养18 h前G0/G1期DNA相对含量明显高于对照组，培养第18小时才恢复同对照组基本相同，说明热打击情况下，细胞周期出现阻滞，细胞被阻滞在G0/G1期，细胞内部活动减缓，处于“休眠”状态，不能进一步发展到S期和G2/M期，从而不能完成整个细胞的分裂过程，大约18 h左右才恢复至正常状态。
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篇2
[关键词]衰老； 血管老化； 细胞骨架；人参三七川芎提取物
[Abstract]To observe the effect of extracts of ginseng， notoginseng， and Chuanxiong Rhizome on the cytoskeleton protein F-actin and G-actin of the replicative senescence vascular smooth muscle cells， with human aortic smooth muscle cells （HASMC） as the research object， and the replicative senescence 9th generation cells as the senescence models， the experiment was divided into youth group （5th generation cells）， model group （9th generation cells）， Chinese medicine low dose group （100 mg・L-1）， middle dose group （200 mg・L-1）， and high dose group （400 mg・L-1） and resveratrol group （10 μmol・L-1）. The intervention time was 48 h. β-Galactosidase specific staining method was used to calculate the ratio of blue dyeing cells. CCK-8 method was used to detect the cells proliferation. The flow cytometry was used to analyze the cell cycle. Immunofluorescent staining was used to observe morphological changes of F-actin and G-actin. The western blot assay was used to determine the expression of F-actin protein. Compared with the model group， the Chinese medicine groups and resveratrol group significantly reduced the number of blue dyeing cells， improved the ability of cells proliferation， reduced the number of cells in G0/G1 phase， increased the number of cells in S phase， and reduced the protein expression of F-actin and the formation of stress fibers， with obvious intervention effect and statistically significant difference. Therefore， the replicative senescence vascular smooth muscle cells can be used as the models for senescence research， with significant changes in morphology and protein expression of cytoskeleton protein F-actin and G-actin in the process of cells aging. The extracts of ginseng， notoginseng， and Chuanxiong Rhizome have obvious intervention effect on F-actin and G-actin， and it might be indirectly associated with delaying the aging of blood vessels.
[Key words]senescence； vascular aging； cytoskeleton； extracts of ginseng， notoginseng， and Chuanxiong Rhizoma
目前我国已进入老龄化社会，且形势十分严峻，预计到2050年，老龄化将达到峰值，65岁及以上人口将超过3亿，占总人口的20%以上[1]。衰老是疾病发生重要的决定性因素[2]，能够加速心血管疾病的其他危险因子。血管老化是人体衰老发生的关键因素，不仅导致动脉粥样硬化的发生，促进机体衰老的进程，而且可以诱发多种疾病[3]。血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）作为血管壁中膜的主要细胞成分，其表型转化及伴随出现的生物学行为改变是血管老化的重要病理学基础[4]。目前有研究表明，细胞骨架的动态改变是促使平滑肌细胞迁移、增殖及表型变化的重要细胞内信号[5]。肌动蛋白（actin）是细胞骨架微丝的主要成分，通常以单体（G-actin）或聚合体（F-actin）形式存在于细胞内，是研究 VSMCs中细胞骨架改变的重要检测指标，且其表达变化受细胞内相关信号因子的调控，如热休克蛋白27（heat shock protein 27，HSP27）、整合素蛋白和凝溶胶蛋白等[6]，其中HSP27调控作用最为肯定。
本课题组一直致力于益气活血中药延缓血管老化的研究，对增龄导致的生理性血管老化和高血压病导致的病理性血管老化进行了较系统的研究，同时，明确了益气活血中药延缓血管老化的一些关键作用机制，比如抗氧化应激、抗AngⅡ干预等，并明确了益气活血中药对血管老化的干预疗效。本研究以人主动脉平滑肌细胞骨架的微丝蛋白F-actin和G-actin为对象，观察益气活血中药人参三七川芎提取物对骨架蛋白F-actin和G-actin的干预作用，为进一步研究细胞骨架与血管老化的关系提供实验依据。
1材料
人主动脉平滑肌细胞HASMC（美国Sciencell公司，Cat No：6110，Lot No：7463）。
SMCM基础培养基（美国Sciencell公司）；胎牛血清（FBS，美国Sciencell公司）；生长因子（SMCGS，美国Sciencell公司）；双抗P/S Solution（美国Sciencell公司）；DPBS溶液（美国Sciencell公司）；细胞冻存液CFM（美国Sciencell公司）；胰酶/EDTA消化酶（美国Sciencell公司）；细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒（杰美基因医药上海科技有限公司）；细胞DNA含量检测试剂盒（细胞周期）（南京凯基生物科技发展有限公司）；CCK-8增殖试剂盒（上海东仁公司）；4%多聚甲醛（北京索莱宝公司）；Triton X-100穿透液（北京索莱宝公司）；罗丹明鬼笔环肽（美国Molecular Probes）；Alexa Flour 488（美国Molecular Probes）；二甲基亚砜（DMSO，北京索莱宝公司）；噻唑蓝MTT（北京索莱宝公司）；小鼠F-actin单克隆抗体（英国Abcam公司）；辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG（上海碧云天生物技术公司）；BCA蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生物技术公司）；超敏ECL化学发光试剂盒（上海碧云天生物技术公司）；高效RIPA组织/细胞裂解液（北京索莱宝公司）。
人参、三七、川芎合剂冻干粉由北京因科瑞斯医药科技公司制备提供。药物均为道地药材，单味药成分检测符合药典的规定和标准，按3∶2∶4破碎成最粗粉，经乙醇回收提取，滤过，药渣弃去，醇提液回收乙醇至无醇味浓缩液，继续浓缩至稠膏，真空减压，干燥至干膏，粉碎装袋，每1 g冻干粉含生药4.286 g。中药冻干粉用PBS配制成贮存液，以0.22 μm滤器过滤并分装，质量浓度25 g・L-1，-20 ℃保存。白藜芦醇（中国食品药品检定研究院，批号111535-200502）用DMSO溶解并配制成贮存液，质量浓度50 g・L-1 ，4 ℃保存。
倒置相差显微镜及成像系统（德国Leica，型号4000B）；流式细胞仪（美国Beckmam，型号Cytomics FC500）；全自动酶标仪（美国Thermo，型号Multiskan MK3）；激光共聚焦显微镜（日本Olympus，型号FV1000）；发光凝胶成像系统（SYNGENE，型号GeneGnome XRQ）。
2方法
2.1细胞培养及传代细胞培养一般隔天换液，待培养瓶细胞密度在90%以上时进行传代，弃去原培养基，用DPBS洗2次；加入1 mL DPBS与胰酶/EDTA混合液（比例为1∶4）；室温放置1.5 min，待细胞变圆时，轻敲瓶底，后加入2 mL完全培养基停止消化，用吸管进行吹打，收集细胞，1 000 r・min-1离心5 min，弃上清加入培养基2～3 mL吹悬，按照1∶2或1∶3传代培养。
2.2分组及药物浓度 实验分为6组，分别为青年组（5代细胞）、模型组（9代细胞）、中药低剂量组（100 mg・L-1）、中药中剂量组（200 mg・L-1）、中药高剂量组（400 mg・L-1）及白藜芦醇组（10 μmol・L-1），药物干预时间为48 h。
2.3β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色鉴定衰老的程度 β-半乳糖苷酶染色法是鉴定细胞衰老的重要指标[7]。将细胞以8×103个/孔接种于24孔板，次日细胞贴壁后，实验组给予药物干预，作用时间为48 h。实验前将GENMED染色液与GENMED稀释液以1∶20配制成工作液，混匀，置入37 ℃水浴箱预热。吸去原细胞培养基，加入500 μL/孔的GENMED清理液，并轻微摇晃24孔板；吸去清理液，加入500 μL/孔的GENMED固定液，室温孵育5 min；吸去固定液，加入500 μL/孔的GENMED酸性液，清洗细胞表面，并重复此操作一次；加入400 μL/孔预热的工作液，37 ℃孵育过夜，次日在光学显微镜下观察并计数，随机选取3个视野，计算蓝色细胞的数量占总视野细胞数量的比值。
2.4CCK-8检测细胞增殖能力将细胞以6×103个/孔接种于96孔板，每组设5个复孔，次日细胞贴壁后，实验组给予药物干预，作用时间为48 h。每孔加入10 μL CCK-8溶液，放入37 ℃培养箱中孵育2 h，上机检测，记录酶标仪所测定450 nm波长的吸光度（A）。
2.5流式细胞仪分析细胞周期常规进行细胞培养，实验组药物干预48 h，消化后离心并用DPBS洗涤2次，去除上清，每组加入70%冰乙醇1 mL吹悬固定，4 ℃保存过夜。次日离心后去除固定液，DPBS洗涤1次，离心去上清，每组加入100 μL RNase A 37 ℃水浴30 min，再加入400 μL PI混匀染色，4 ℃冰箱避光放置30 min，后上机检测。
2.6激光共聚焦显微镜观察细胞F-actin和G-actin结构的改变将细胞以6×103个/孔接种于黑色96孔板，贴壁后，实验组药物干预48 h。吸去原培养基，用DPBS清洗细胞2次，加入4%多聚甲醛100 μL/孔，室温下固定15 min，再用DPBS清洗细胞5 min×3遍；加入0.1% Triton X-100 100 μL/孔，室温下穿透5 min，再用DPBS清洗5 min×3遍；最后加入罗丹明鬼笔环肽2.5 μL（0.5 U）/孔和Alexafluor488 DNase I 2 μL/孔共染色，避光室温放置30 min，再用DPBS清洗5 min×3遍，上机观察F-actin和G-actin的形态学改变。
2.7Western blot 检测F-actin蛋白的表达细胞样品中加入100 μL含蛋白酶抑制剂、PMSF的RIPA 裂解液，超声波破碎仪破碎10 s，4 ℃16 000×g离心10 min，按BCA蛋白浓度检测试剂盒说明书对样品蛋白总浓度进行测定，加入样品1/4体积的5×Loading buffer，100 ℃加热10 min。进行电泳及转膜后，5%脱脂奶粉室温封闭1 h，完成后用TBST洗膜3次，一抗稀释比例1∶250，4 ℃水平摇床孵育过夜。二抗用5%脱脂奶粉封闭液稀释，稀释比例1∶3 000，室温孵育60 min，TBST洗涤3×10 min。将膜平铺在干净的保鲜膜上，滴加配置好的ECL反应液反应2 min，曝光及扫描。
2.8统计学分析应用SPSS 18.0软件进行统计分析，其中计量数据以±s表示，多组样本采用单因素方差分析，用Levene法检验方差齐性，若方差齐，采用LSD法进行两两比较；若方差不齐，则采用Tamhane法。以P
3结果
3.1对SA-β-gal衰老染色的影响通过对各组染色结果的观察和计数，与青年组相比，模型组细胞蓝染数比例增多，具有显著性差异；与模型组相比，中药低、中、高剂量组及白藜芦醇组细胞蓝染数比例均明显降低，均有显著性差异（图1，表1）。
3.2对细胞增殖能力的影响各组CCK-8细胞增殖能力的检测表明，与青年组相比，模型组A明显减少，具有显著性差异；与模型组相比，中药中剂量组A明显增加，具有显著性差异，中药低剂量组A增加，具有差异性，而中药高剂量组及白藜芦醇组A增加，但无统计学意义（表1）。
3.3对细胞周期的影响通过对各组流式细胞周期的检测表明，与青年组相比，模型组G0/G1期细胞明显增多，S期细胞减少，均有显著性差异；与模型组相比，中药中、高剂量组及白藜芦醇组G0/G1期细胞明显减少，S期细胞增多，具有显著性差异，中药低剂量组则无统计学意义；G2/M期细胞数目变化均无统计学意义（表2）。
A.青年组；B.模型组；C.中药低剂量组（100 mg・L-1）；D.中药中剂量组（200 mg・L-1）；E. 中药高剂量组（400 mg・L-1）；F.白藜芦醇组（10 μmol・L-1）（图2，3同）。
3.4对细胞F-actin和G-actin形态学的影响激光共聚焦显微镜显示，青年组细胞排列紧密，F-actin（红染）主要在细胞表面及外周分布，线条完整连续；G-actin（绿染）主要在细胞的中央区域分布，呈致密的椭圆形，染色清晰、饱满、圆润。模型组细胞体积变大，形态不规则，F-actin边缘毛糙不规整，出现锯齿样断裂，部分呈纵向平行排列，形成大量应力纤维；G-actin向细胞周边区域伸展，部分出现边缘变模糊呈絮状，细胞中央区域染色变弱。模型组与青年组相比，F-actin/G-actin荧光强度比值增大，具有显著统计学差异。各给药组F-actin边缘较模型组清晰光滑，且较少断裂；G-actin则主要集中于细胞中间，染色略欠饱满，尚清晰圆润。与模型组相比，中药低、中剂量组及白藜芦醇组F-actin/G-actin荧光强度比值降低，具有统计学意义，中药高剂量组则无统计学意义（图2，表3）。
3.5对F-actin和HSP27蛋白表达的影响与青年组相比，模型组的F-actin蛋白表达明显增多，具有显著差异性；与模型组相比，中药中、高剂量组及白藜芦醇组F-actin蛋白表达减少，具有显著差异性；与青年组相比，模型组HSP27蛋白表达明显减少，具有显著差异性；与模型组相比，中药低、中、高剂量组及白藜芦醇组HSP27蛋白表达明显增多，具有显著差异性（图3，表3）。
4讨论
衰老是不可抗拒的自然规律，而血管衰老是人体衰老的关键始发因素[8]。 在血管老化的过程中，中膜平滑肌细胞高增殖、高移行、分泌性改变是内膜增厚、血管重构的关键因素。VSMC发生表型转化的过程中伴随着细胞骨架的重构，同时骨架重构又是VSMC由收缩型向合成型转化过程中细胞收缩能力下降、发生迁移和黏附等改变的病理生理基础[4]。肌动蛋白是构成细胞骨架微丝的基本成分，以单体G-actin或聚合体F-actin形式存在，肌动蛋白具有收缩、保持细胞的形状、运动、细胞间黏附等多种功能，同时参与细胞增殖过程[9]。有研究表明，调节机体衰老的多条通路均与F-actin的改变密切相关，如哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路、胰岛素/胰岛素样生长因子（IGF-1）通路和去乙酰化酶（SIRTS）通路等[10-12]。
气血是构成机体的基本物质，二者关系密切，随着衰老的进行，气虚血不行，血虚气不化，气虚血少，气血运行不畅，最终导致气虚血瘀之证，从而加速了机体衰老的进程。中药人参、三七、川芎合方属于益气活血治法的范畴，在心脑血管疾病中被广泛应用，三药合剂具有延缓血管衰老、保护血管内皮细胞及调节血管活性物质等作用[13-14]。白藜芦醇具有激活SIRT1通路、抗氧化、调节自噬及保持端粒酶活性等作用，是目前比较公认的延缓衰老的对照药物。
本研究以复制性衰老的血管平滑肌细胞为对象，以β-半乳糖苷酶染色、CCK-8细胞增殖活性和细胞周期作为判断细胞衰老程度的指标，并观察人参三七川芎提取物延缓细胞衰老的作用。实验结果表明衰老的细胞多停滞在细胞周期的G1期，S期细胞数量则减少，且体外增殖能力相对减弱，同时形态学表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的特征，并且在酸性环境下，细胞内β-半乳糖苷酶活性增加，表现为细胞蓝染数目增多。药物干预后，停滞在G1期的细胞数量减少，同时S期细胞数量增加，且β-半乳糖苷酶染色细胞蓝染数目减少，表明人参三七川芎提取物具有延缓血管平滑肌细胞衰老的作用。细胞骨架方面，青年组细胞微丝结构以单体G-actin为主，主要在细胞的中央区域分布，呈致密的椭圆形，染色清晰、饱满、圆润；聚合体F-actin主要在细胞表面及外周分布，线条完整连续。模型组G-actin向细胞周边区域伸展，部分出现边缘变模糊呈絮状，细胞中央区域染色变弱；F-actin边缘毛糙不规整，出现锯齿样断裂，部分呈纵向平行排列，且蛋白表达量增加，形成大量应力纤维。药物干预后，F-actin边缘较模型组清晰光滑，且较少断裂，蛋白表达量减少；G-actin则主要集中于细胞中间，染色略欠饱满，尚清晰圆润。而HSP27作为细胞骨架蛋白的主要调控因子，反向调节着F-actin的表达。
综上所述，复制性衰老的血管平滑肌细胞可以作为衰老研究的模型；细胞骨架微丝蛋白G-actin和 F-actin形态及蛋白表达在细胞衰老过程中改变明显，其可能直接参与平滑肌细胞由收缩型向合成型转化等衰老的进程；人参三七川芎提取物可以一定程度上延缓血管老化，且对于细胞G-actin和 F-actin有明显干预作用，其可能间接通过此作用延缓了血管老化的进程。
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篇3
资料与方法
本组107例，男84 例,女23 例。年龄＜17~60岁;左侧48 例,右侧59 例;横形骨折39 例,粉碎性68例; 直接暴力72例，间接暴力25例；均为闭合性骨折。
复位方法：患肢取伸直位，或微屈呈15°～30°中立位，术者站于患侧，一手拇指及示中指捏挤骨折远端向上推，并固定之；另一拇指及示中指捏挤近端上缘向外侧角向下推挤，使骨折断端接近。经上述手法，骨折远近端对位良好，即可暂时固定，然后采用摸法检查，若残余的前后移位，手指触摸不平时，以一手拇食指固定下陷的一端，另手拇指挤压向前突出的另一端，使之对齐、平整。最后将骨折远端挤紧，用制备好的抱膝圈固定，如骨折对位较差可隔1～2日再推挤1次，用抱膝圈固定。
固定方法：①夹板的制备：取五层椴木胶合板1块，长度自患肢大腿中上1/3至踝上2cm，宽度基本与患肢相应横径等宽，用脱脂棉及绷带塑制吻合肢体生理弧度的夹板，用绷带塑制大小适度的抱膝圈备用。②骨折复位满意后，先放置超膝后侧夹板，然后将抱膝圈套于髌骨周围，固定带分别扎在超膝后侧夹板上。然后用三列绷带将患肢与后侧夹板缠绕固定，固定后要注意观察患肢足背动脉搏动情况，以防固定过紧。抬高患肢，做患肢股四头肌收缩锻炼及患踝屈伸运动，以加速患肢血液循环，促进消肿。3～5天调整固定1次，随着肿胀的消退，逐渐缩小抱膝圈，使抱膝圈能起到良好的固定效果。
药物治疗：遵循骨折三期辨证论治的原则,早期活血祛瘀、消肿止痛,内服三七活血胶囊消肿止痛;中期和营生新、接骨续损,内服接骨丹；后期培补肝肾、强壮筋骨,内服壮筋续骨丹，解除外固定后,用我院下肢洗药煎汁熏洗患肢。
结 果
本组106例均获得6个月以上随访,49例完全无痛、股四头肌肌力5级、膝关节主动伸直正常，屈曲受限在20°以内、无晚期创伤性关节炎症状出现；48例偶有疼痛但不影响日常生活及工作，股四头肌肌力5级，屈曲受限在20°以内，无晚期创伤性关节炎症状出现。10例膝关节疼痛，屈曲受限在30°以内，轻度晚期创伤性关节炎症状出现。
篇4
（一）全年蔬菜价格高位运行，走势与2009年趋同
2010年，全区蔬菜价格（15个蔬菜监测品种平均价格）普遍高于2009年，价格走势与2009年基本趋同，上半年全区蔬菜平均价格达到2.77元/500克，高于全年平均价格。其中，一季度价格偏高，进入二季度以来，价格开始有所回落，7月份价格达到谷底，之后开始回升，三季度保持小幅上扬趋势；进入四季度以来，蔬菜价格上涨幅度较大，价格明显走高，涨幅明显高于去年同期。从全年价格走势来看，与去年价格变动趋势基本趋同，但价格波动较大。
（二）蔬菜价格同比增长明显，增幅波动剧烈
2010年以来，蔬菜价格涨幅较大，截至11月上旬，较上年平均涨幅超过22%，而进入四季度以来，涨幅一路走高，11月上旬达到41.22%，价格远高于上年同期。从全年涨幅走势来看，一季度保持高位，二季度增幅有所减缓，三季度以来增速波动较大。
（三）“大众菜”价格走势平缓，“细菜”价格波动剧烈
从各月蔬菜价格情况来看，土豆、萝卜、白菜等大众菜价格走势较为平缓，而黄瓜、西红柿、豆角、青椒、茄子等“细菜”波动剧烈。黄瓜最高价由年初3.91元/500克到最低7月1.14元/500克，11月上旬达2.5元/500克，并开始逐步走高。青椒最高与最低价相差2.86元/500克，豆角最高与最低价相差3.77元/500克；而土豆、萝卜、白菜等大众菜价格最高相差不超过1.25元/500克，且全年价格基本在固定区间平缓波动(详见图3-5)。
（四）各地蔬菜涨价明显，价格过快增长
从自治区价格监测中心监测地区显示数据来看，11月上旬，除乌海市蔬菜价格低于上年同期外，其它监测地区均高于去年同期，其中，牙克石市涨幅达到71.17%，包头市、呼伦贝尔市、赤峰市、科尔沁区、集宁区、东胜区、临河区涨幅超过50%，其它涨幅均超过24%，价格显著增高。满洲里市蔬菜平均价格高达3.10元/500克，蔬菜价格最低的赤峰市也达到1.82元/500克。
二、蔬菜价格走势原因分析
（一）受季节性因素影响，蔬菜价格全年波动较大
受2009年雨雪、冰冻灾害影响，全国蔬菜生产受损严重，产量大幅减少，加之北方地区连降大雪，运输受阻，部分地区蔬菜供应紧张。同时，2009年12月下旬国内成品油价格连续上调，使得购进蔬菜的运输成本增加。随着春节临近，蔬菜市场需求量增加，一季度，我区蔬菜价格涨幅明显，呈高位运行；进入二季度，由于气温回升，我区地产蔬菜尤其应季蔬菜大量上市，蔬菜市场供应量大幅增加，蔬菜价格降幅明显，但土豆、胡萝卜、萝卜由于不是大量上市的季节，市场供应依然较为紧张，价格呈现上涨的走势；三季度，随着本地菜供应量进一步加大，蔬菜价格基本达到全年最低，呈小幅波动；10月以来，蔬菜价格明显上扬，在15个蔬菜监测品种中，除白菜、土豆、萝卜3个当地产蔬菜品种涨幅趋缓外，其它蔬菜价格上涨较快。随着天气转冷，输入型蔬菜比例增大，进入冬季，运输用柴油由0号变为－10号、－20号柴油，运输成本增加。当前全国油气短缺进一步加剧蔬菜运输成本，蔬菜价格仍会继续走高。
（二）冬季输入菜居多，蔬菜价格受产地影响较大
由于本地果绿蔬菜通过温室培育成本价远高于外地菜，而5、6月份收储菜冬季销售则需放到恒温菜室，蔬菜损耗率高，贮存成本大。因此，我区冬季蔬菜供应大多依赖外地调运，仅有部分白菜、大圆菜等冬储菜能本地供给，外运蔬菜主要来自山东寿光、淄博、河北唐山，云南昆明、广东、四川、海南等地区。近年来，宁夏、甘肃等地冬季叶绿菜供应量逐步增大。以呼和浩特市为例，进入冬季以来，外地菜供应量占总供应量高达80%-90%。本地蔬菜供给少，对整个市场的影响微乎其微，使得冬季蔬菜价格、供给量主要受制于蔬菜产地。2010年以来，我国气候表现反常，持续不断的干旱、雨雪冰冻、高温暴雨等恶劣天气，严重影响到各季蔬菜的生长，在不少地区鲜菜产量大幅萎缩，使得菜价阶段性、季节性价格走高。
（三）农资价格上涨，是蔬菜价格持续走高的趋势性原因
随着工业化、城镇化进程加速，农产品生产三大“基础成本”――生产资料、劳动力和土地价格刚性上涨渐成常态，农产品进入趋势性的上涨通道。国家统计局数据显示，2010年7月以来，我国价格总水平逐月攀升，以农副产品为主的生活必需品价格上涨较快，10月份CPI达到4.4%，创下25个月来新高，而在新涨价因素中，食品类价格上涨10.1％，为CPI涨幅“贡献”了74％。随着城市地价快速上涨，拉动了城郊地价，并进一步传导至农业地价。此外，一些农业龙头加工企业和种植大户大规模租地经营，也在一定程度上提高了农村地价，从而抬高农产品生产成本，推升农产品价格。同时，随着大量青壮年劳动力流入城镇，“用工荒”现象也在一些地方的农业领域出现，导致农村劳动力价格迅速上升，农产品尤其是蔬菜等劳动密集型产品价格必然会更加高昂。
（四）“城市化”进程加快使得城郊菜地大量被占，直接导致蔬菜价格上涨
近年来，随着城市化进程不断推进，城市建设速度加快，城市近郊的土地大量被征为建设用地。2009年，全区城市建成区面积较“十一五”期初增长了17.5%，土地征用面积达到“十一五”期初征用面积的2倍，许多地方的菜地都成了城区的马路和商品房，而新的菜地建设并没有及时跟上，造成菜地大幅度减少。同时，城市化向前推进，使得城市人口不断膨胀，2009年，全区市镇人口达到1293.5万人，较“十一五”期初增加了129.9万人，市区人口密度较“十一五”期初增长了59%，使城市蔬菜消费量大量增加，蔬菜需求缺口加大。呼和浩特市近年来由于城市建设速度加快，近郊的菜地基本有50%被征用成为建设用地，使得蔬菜种植面积因此大幅度减少，本市的蔬菜种植基地只留下8万亩，保护地温室大棚不足1万亩，地产蔬菜供应能力锐减，大量蔬菜依靠外地供应。按照呼和浩特市总人口每人每年最少150公斤的需菜量计算，需要蔬菜量100多万吨，而目前呼和浩特市全年的蔬菜产量是60万吨左右，缺口高达40多万吨。巴彦淖尔市临河区随着市区扩展，本地产蔬菜仅能满足市场需求量的30%， 70%的蔬菜需求要靠外运。与此同时，随着人口增加及人们生活水平提高，健康观念改变，对蔬菜特别是“细菜”的需求量不断增加，加之许多原来自给自足、有富余还出售蔬菜的农民，现在已经变成到菜市场买菜的消费者，也使得蔬菜消费量大量增加。本地蔬菜供应远远满足不了市场需求，直接导致蔬菜价格上涨。
三、对稳定我区蔬菜价格的几点建议
（一）加大蔬菜生产的扶持力度，保证蔬菜供给
在大力推动工业化和城市化的进程中，重视和关注人们日常生活所必需的蔬菜副食品的生产和建设。各地要切实做好规划，并在规划基础上分步实施好各蔬菜基地的建设，对适宜发展蔬菜生产的地区，建立和发展蔬菜生产基地，保证蔬菜种植面积，特别是要加大对城市周边蔬菜生产的扶持力度，对城市扩张征用的菜地收取蔬菜基地补偿金，并真正用于发展新的蔬菜生产基地，扶持菜农，通过专项的政策性补贴来促动蔬菜的生产和扩大供给，保持蔬菜产业的稳定发展。
（二）加快蔬菜等鲜活农产品 “绿色通道”建设，降低蔬菜运输成本
运输成本主要是油价和过路过桥费两方面，而运输成本又都增加到菜价里面，增加了市民支出，减少了市民购买量。要进一步完善蔬菜等鲜活农产品运输“绿色通道”政策，对整车合法装载运输鲜活农产品的车辆免收车辆通行费。对蔬菜运销企业，有关部门应该给予帮助，发放绿色通行证，建立绿色通道，缩短蔬菜运输时间。同时，蔬菜运销企业要加强自律，搞好交通法规培训，杜绝“超重”、“超速”现象发生，保障蔬菜运输安全。
（三）加大市场设施建设力度，促进蔬菜商品的流通顺畅
选择一批条件较好的大型蔬菜批发市场，通过企业自筹、多元化投资、政府扶持等方式，加强产地蔬菜预冷设施、批发市场冷藏设施、蔬菜低温配送中心建设，推广节能环保的冷链运输车辆，配套清选、分级、包装等净菜处理及相关设备，改善市场场地、道路、交易厅（棚）、水电、信息服务、质量检测、电子结算等基础设施，实现采后快速预冷、商品化加工处理和上市旺季入库冷藏保鲜。加快城区蔬菜市场和零售网点建设，在场地环境、设施设备、质量安全检测、垃圾处理、规范管理等方面进行标准化建设，建立便捷、安全、规范、高效的蔬菜零售平台。
（四）加强市场监管，维护正常市场价格秩序
篇5
关键词：事故车 现场查勘 典型案例 酒驾调包
The substitution case analysis of the drunk driving in accident site survey Sichuan Vocational and Technical College of Communications
Feng Bo
Abstract： The site survey is an important means of evidence collection， it is the important basis of insurance claims and case litigation. The substitution case of the drunk driving is a kind of common cases in the process of site survey. In this paper， it analyses a real case to illustrates the general recognition method for such cases.
Keywords： accident car， site survey， typical case， substitution in drunk driving
引言
现场查勘是指运用科学的方法和现代技术手段，对事故现场进行实地勘察和检验，通过分析存留的物证和询问认证等渠道获得事故产生的原因，并采用拍照、绘图等方式将事故结果方便而准确记录下来的工作过程。它是保险赔付、案件诉讼的重要依据。
酒驾调包是在现场查勘中常常会遇到一类案件。虽然《道路交通安全法》中对酒后驾车行为有明确的处罚规定，同时在保险公司合同条款中，也规定酒后驾驶属于免赔范围，但部分驾驶员仍难改酒后驾驶的习惯。在车辆出险后，由于驾驶员担心受到处罚并且被保险公司拒赔，于是找来他人顶包。在现场查勘过程中，如何对这类案件进行准确识别以避免保险公司损失，是查勘员必备的能力。下面就通过对一个真实酒驾顶包案件的分析来说明针对这类案件的识别方法。
一、出险情况
2012年9月11日凌晨4时左右，罗某称其驾驶一辆车牌号为粤A××的汽车由梅林关往清湖方向的××大道行驶，为避让车辆右打方向盘不慎撞上路基，后报保险公司。
二、现场情况
查勘员到达现场时，现场有两辆黑色轿车停在不远处，五六个人围在一起。这些人见查勘员到来，立即驾驶车辆离开。标的车停靠在距路基前方20m的公路边，一路上留下标的车轮轧过的痕迹，标的车前杠断裂，内部件于表，方向机断开，机油撒了一地，车内驾驶员方向盘处安全气囊爆裂。报案人罗某称自己是为了避让旁边准备超车的车辆，才猛打方向盘，撞上路基的。查勘员到达时除了罗某在现场外，还有车主黄某在现场。黄某一身酒气，并称自己也是刚到现场。
三、疑点分析
1.案发时间是当夜凌晨4点多，路上车辆已经很稀少，并且案发道路单向有四根车道。根据经验，在车少路宽的情况下一般车辆不会乱变道。
2.在询问过程中，报案人罗某称车是从车主黄某处借来的，但何时何地借车，驾车从哪里到哪里等细节都说不上来。而一身酒气的车主黄某却主动上来向查勘员讲解事发经过。
3.整个询问过程中，罗某神情紧张，常用眼角余光看黄某。
综上疑点分析，此案很有可能是车主黄某酒后驾车，出险后找来罗某顶包。
四、处理方法
为了印证疑点，查勘员分别让罗某与黄某分别到标的车试坐一下。黄某一上车就手握方向盘，脚踩踏板，动作自然。而罗某上车后呆滞地坐于座位上，连手都不知道该放哪里好。
接下来，查勘员让当事人黄某与罗某分别拿出手机，查看他们的通话记录。通话记录显示：在4时以后，黄某与罗某分别与一个叫黄文的人频繁通电话。车主黄某是4时08分与黄文通电话，而罗某是4时11分与黄文通电话。为何黄某先知道事故发生呢？并且罗某4时12分报的保险公司，此后罗某又频频与黄文通话。
图1 车主黄某坐在驾驶员座位上 图2报案人罗某坐在驾驶员座位上
图3罗某电话记录 图4 黄某电话记录
鉴于以上情况，查勘员进一步怀疑驾驶员是黄某而非罗某。
查勘员随即告知当事人，由于案子较大，必须报交警，然后现场做了笔录。交警到达现场后，查勘员对交警说明了事故情况，并告知客户，由于事故较大，且有不明朗的地方，现场无法开单，需要转保险公司调查。随后标的车被拖到了交警中队。
五、处理结果
凌晨八点多，报案人罗某打电话给查勘员称放弃索赔，希望销案处理。由此可见，此案为典型的酒驾掉包案件。本案最终以报案人签字同意销案告终。
六、案例总结
总结以上案例，可以看出对于识别这类酒驾调包案件的几个要点。
1.查勘员到达现场后要仔细观察现场情况，包括道路情况、标的车情况、报案人、车主及周围环境情况等，看有无不合常规情理现象。此外，若有表1中所列现象，则应引起注意。
2.进行询问时注意对相关细节进行提问。具体询问要点可参照表1。若报案人对于多个要点都答不上来，则要引起注意。
3.询问时注意观察被询问人的语速、表情、神态等。若被询问人说话支支吾吾、神情紧张、东张西望等，可初步判断其说谎。
4.对疑点进行印证时，可要求报案人及嫌疑人都坐到驾驶员座位上，以观察标的车座位与人体的吻合情况。
5.可要求查看报案人手机的通话记录，注意通话时间及通话对象，从中找出与案件相关的蛛丝马迹。
6.若现场有监控摄像头，可与监控方协商调取案发时间前后的监控录像，作为确定案发经过最直接的证据。
参考文献
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篇6
我的毕业设计作的是混凝土框架结构，因此对于混凝土机构的了解要更有针对性。混凝土质量的好坏，既对结构物的安全，也对结构物的造价有很大影响，因此在施工中我们必须对混凝土的施工质量有足够的重视。混凝土质量的主要指标之一是抗压强度，从混凝土强度表达式不难看出，混凝土抗压强度与混凝土用水水泥的强度成正比，按公式计算，当水灰比相等时，高标号水泥比低标号水泥配制出的混凝土抗压强度高许多。所以混凝土施工时切勿用错了水泥标号。另外，水灰比也与混凝土强度成正比，水灰比大，混凝土强度高3水灰比小，混凝土强度低，因此，当水灰比不变时，企图用增加水泥用量来提高温凝土强度是错误的，此时只能增大混凝土和易性，增大混凝土的收缩和变形。 综上所述，影响混凝土抗压强度的主要因素是水泥强度和水灰比，要控制好混凝土质量，最重要的是控制好水泥和混凝土的水灰比两个主要环节。此外，影响混凝土强度还有其它不可忽视的因素。粗骨料对混凝土强度也有一定影响，当石质强度相等时，碎石表面比卵石表面粗糙，它与水泥砂浆的粘结性比卵石强，当水灰比相等或配合比相同时，两种材料配制的混凝土，碎石的混凝土强度比卵石强。因此我们一般对混凝土的粗骨料控制在3.2cm左右，细骨料品种对混凝土强度影响程度比粗骨料小，所以混凝土公式内没有反映砂种柔效，但砂的质量对混凝土质量也有一定的影响。因此，砂石质量必须符合混凝土各标号用砂石质量标准的要求。由于施工现场砂石质量变化相对较大，因此现场施工人员必须保证砂石的质量要求，并根据现场砂含水率及时调整水灰比，以保证混凝土配合比，不能把实验配比与施工配比混为一谈。混凝土强度只有在温度、湿度条件下才能保证正常发展，应按施工规范的规定予在养护、气温高低对混凝土强度发展有一定的影响。冬季要保温防冻害，夏季要防暴晒脱水。现冬季施工一般采取综合蓄热法及蒸养法。如果是设计造成的缺陷，一般有设计承载力或设计工作条件与实际不符造成裂缝、变形、侵蚀等破坏;如果是使用造成的缺陷，一般有超载、侵蚀、火灾、冻融、风化破坏等。
近年来预应力混凝土应用范围逐渐推广到更多的结构领域，如大跨超长、超厚及超静定框架结构，其混凝土强度等级必须提高至c50。在采用泵送条件下，其收缩与水化热大大增加，约束应力裂缝很难避免，张拉前开裂，张拉后又不闭合，裂缝控制的难度更加困难。预应力结构裂缝允许宽度是严格的，预应力筋腐蚀属“应力腐蚀”并有可能脆性断裂，预兆性较小，裂缝扩展速度快。裂缝深度h与结构厚度h的关系如下：h≤0.1h表面裂缝;0.1h
应当尽量避免贯穿性及纵深裂缝，如出现该种裂缝应采取化学灌浆处理来保证强度，即贯缝抗拉强度必须超过混凝土抗拉强度。
在修补裂缝前应全面考虑与之相关的各种影响因素，仔细研究产生裂缝的原因，裂缝是否已经稳定，若仍处于发展过程，要估计该裂缝发展的最终状态。在日本混凝土协会“混凝土裂缝的调查和修补指南”中，对调查的原则、普查、详查方法均作了详细规定，主要有：
裂缝的现状调查(裂缝类型和宽度);有无病害(漏水、钢筋锈蚀);产生裂缝的经过(发生时间和过程);设计书的检查;施工记录的检查;根据混凝土钻芯检查构件的强度、厚度;荷载调查;中性化试验;钢筋调查(钢筋位置、细筋数量及有无锈蚀);地基调查;混凝土分析;荷载试验;振动试验。
裂缝的处理
1.表面处理法：包括表面涂抹和表面贴补法
表面涂抹适用范围是浆材难以灌入的细而浅的裂缝，深度未达到钢筋表面的发丝裂缝，不漏水的缝，不伸缩的裂缝以及不再活动的裂缝。表面贴补(土工膜或其它防水片)法适用于大面积漏水(蜂窝麻面等或不易确定具体漏水位置、变形缝)的防渗堵漏
填充法用修补材料直接填充裂缝，一般用来修补较宽的裂缝()0.3mm)，作业简单，费用低。宽度小于0.3mm，深度较浅的裂缝、或是裂缝中有充填物，用灌浆法很难达到效果的裂缝、以及小规模裂缝的简易处理可采取开v型槽，然后作填充处理。2.
灌浆法
此法应用范围广，从细微裂缝到大裂缝均可适用，处理效果好。
2.结构补强法
篇7
【关键词】加油站；火灾爆炸；分析与预防
加油站是危险化学品经营企业，所经营的油品汽柴油都是易燃易爆液体。因此分析加油站火灾爆炸的原因对其采取有针对性的预防措施，是加油站安全管理的关键。下面我们通过对加油站发生的火灾爆炸事故案例分类进行分析，并提出相应的预防措施和建议。
一、卸油引起的火灾爆炸事故
（1）沙特阿拉伯首都利雅得闹市区巴塔的一家加油站着
火，时间是2000年8月11日傍晚，烧毁20辆汽车、烧伤3人，大火引起的原因是由于卸油员违规操作导致大火出现。此外，由于利雅得的夏季非常炎热，到了傍晚时室外温度还很高，这段时间严禁卸油。（2）河北省黄骅市加油站在油罐车向储油罐内输油时突发爆炸，时间是2000年9月10日0时30分，事故造成1人重伤、2人死亡，重伤患者98%的Ⅲ度烧伤有严重的生命危险。（3）湖北公安县加油站发生爆燃事故，时间是2002年
01月07日，事故造成2人受伤，1人死亡。该加油站的地理位置是宏泰客运公司院内，西接一集贸市场，东临车站，地下埋藏储油罐4个，装有18吨汽、柴油。事故的主要责任是由于司机彭正秋严重违规操作，没有采用密封式输油法进行输油，而是将输油管直接插入储油罐所致。员工吴本军在关闭阀门的时候，由于穿的衣服出现静电，导致燃爆发生。（4）2011年1月12日
16时45分许，河北省廊坊市和平路一中石化加油站发生起火爆炸事故。廊坊市官方称，事故未造成人员伤亡，起火原因为油罐车卸油后，静电火花引发起火爆炸。以上4起事故除一起是由于汽油从量油孔外溢，流入下水道，油蒸汽与空气形成爆炸性混合气体，遇火源引起的爆燃，其余2起都是静电引起的火灾爆炸事故。汽油的闪点是-50℃，与空气的比重为0.67～0.71，爆炸极限约为1.3～6%，它有一个很重要的物理特性就是非常容易气化，挥发性非常强，有时我们用肉眼也能看到汽油液面有一层蒸腾着的雾气，1升汽油能挥发成100～400升蒸气，扩散到很大的空间。有时火源离开汽油似乎很远，但与汽油蒸气接触仍会引起燃烧，如果汽油蒸汽的浓度达到爆炸极限，就会引起爆炸。卸油时充装过快，无防静电设施或防静电设施未起作用和未穿戴防静电劳动保护护具等，会引起大量的静电电荷积累（当带电体因电荷积累达到一定的静电电位时一般大于
300v）引起放电，引燃引爆油蒸汽而发生的事故。火灾爆炸的三个条件为：火源、可燃物、空气。加油站最需要控制的火源（除明火以外）是静电放电。静电放电导致火灾爆炸需要具备以下四个条件：一是静电的来源有的产生；二是使静电能够积聚，并且要有足够大的电场强度和达到起火点放电的静电电压；三是静电放电所得到的能量能够达到爆炸性混合物的最小燃点；四是静电放电火花的周围环境有爆炸性混合物存在，其浓度达到爆炸极限。我们在卸油操作时一定要防止油气外泄，并防止有明火，同时防止静电的积聚，卸油作业时要做好以下几点：一是操作人员必须穿戴好防静电护具。油罐车卸油前要按装好防静电夹钳。二是通过液位或人工计量检测确认所卸油品的空容量；防止跑、冒油事故发生。三是采用密封卸油，按工艺要求连接接卸油管；同时暂停加油作业。四是司机缓慢开启罐车卸油阀，卸油员集中精力监视卸油全过程，随时处理突发的问题；卸车司机不得远离现场。五是卸油完毕，卸油员登上罐车检查确认油品卸净，关好油罐阀门，使油罐处于密闭状态。罐车司机应关好罐车所有阀们及帽口，使罐车出于密封状态。六是引导油灌车离站。七是罐内油品静止10分钟后，方可通知加油员开机加油。
二、加油区的火灾爆炸事故
（1）位于郑州市商城路闹市区的郑州标准石化有限公司商城路加油站发生爆炸，事故时间2001年7月23日下午3时，事故导致1人重伤，10人轻伤和轻微伤，4人死亡，爆炸直接造成近20万元的财产损失，有关责任人被判3年有期徒刑。爆炸原因主要是一台加油机漏油渗入地下室，由于地下室汽油蒸汽挥发遇电打火导致的。（2）一辆摩托车驾驶员到加油站给车加油的时候，把摩托车停在计量机旁，关闭发动机之后用发动机钥匙打开油箱盖等着加油。加油员看到客人就迎了上来，将合成树脂材料的油箱盖放在旁边的水泥防护台上，没有带防护手套，直接用手握住加油柄，把加油枪口接近摩托油箱口开始加油。等油加到1.5升时，突然从摩托车加油口处冒出火苗。（3）成都市高新区某加油站内一台加油机突然发生爆炸，事故发生时间是2001年12月24日上午10：54。对这几起事故，我们分别作分析：第一起是加油机漏油，加上电气打火，引起的爆炸事故；第二起是摩托车加油没有按照规程操作，静电放电引起的火灾事故。员工没有穿防静电纯棉制服、鞋，加油机接地线损断，而且在给这台车加油前已加出了221升，加油之前，没有按照规定的要求把加油枪应先搭在油箱口，把静电导走后从新启动加油泵，由于静电聚集，在油箱口处引起放电，引燃油箱口汽油蒸气；第三起是加油机泄露并加油机有爆炸空间，线路漏电引起的爆炸事故。通过分析我们知道要避免以上事故的发生，就要做到以下几点：一是加油站的设备、设施要定期检查、检修、检测并形成制度。发现问题、隐患要及解决、整改。二是加油站工作人员上班要穿着防静电工作服具。三是要严格执行加油规程，加油站十不准等有关规定。
三、检修、清罐时引起的火灾爆炸事故
（1）在阜新市振兴加油总站，阜新远弘能源科技有限公司租用振兴加油总站一个油罐和这个油罐所连接的一把加油枪。2011年9月24日上午9时左右，远弘能源部门经理胡龙飞雇来刘学云等3名清灌工人，现场签订清罐协议后，开始清罐作业，下午四时左右第一个油罐清洗结束，胡龙飞和刘学云结清费用后，李博（站长）提出再清洗一个油罐（汽油罐），向油罐里送风后，李博、李博的妻子、胡龙飞及王昌伟（远弘能源）陆续离开了油罐区，送风5、6分钟左右，油罐区域瞬时燃烧起来，清罐的三名工人浑身是火跑出油罐区域。120救护车紧急将三名伤者送往矿总院烧伤整容科急救。事故发生后，海州消防大队第一时间赶到现场，（当时现场明火已经被加油站的员工扑灭），事故现场保存完好。2011年2月26日，清罐工人刘学云经抢救无效死亡。此次事故造成1人死亡，两人重伤。（2）在江苏省宜兴市官村镇春江加油站员工在清洗埋地式柴油罐时发生爆燃事故，事故时间是2001年4月26日14时20分，事故导致1人死亡。（3）在江苏省兴化市唐刘加油站发生油罐爆炸事故，事故时间2002年3月11日下午1时15分左右，当场2人被炸死，另有2人受伤。事故发生的主要原因是由于加油站油罐改造施工，罐内残余气油遇到明火引起爆炸。第一起事故是清柴油罐残留的油蒸汽与当时风机排出的汽油蒸汽混合在一起，油罐区内油蒸汽与空气混合浓度达到了爆炸极限范围内（1.3%～
篇8
[Abstract] Wet encased steel strengthening technology is a major means of strengthening existing housing construction, and has been widely used in the engineering actual reinforcement. Combined with an existing building reinforcement engineering in Huizhou city, the wet encased steel strengthening calculation process and matters needing attention are elaborated, and provides some experience and methods for engineering designers on reinforcement design
[关键词] 湿法外包钢加固 结构胶 灌浆
[Keywords]wet encased steel strengthening technology; structural glue; grouting
中图分类号：TU753.8文献标识码：A文章编号：
1．前言
由于城市建筑空间的日益紧张，考虑到环保，节能的要求，对既有建筑的加固补强研究已经引起了我国土木工程界的广泛重视。原苏联在工程加固方面起步较早，对工业厂房加固设计构造积累了较为丰富的经验，并出版了专门的结构加固构造图集；英国，原联邦德国在混凝土结构缺陷修补，防水与防腐处理方面也积累了一定的经验。我国截至目前继续已经颁布了《混凝土结构加固技术规范》，《建筑抗震加固技术规范》，《混凝土结构加固设计规范》等行业指导规范和《砖混结构加固与修复》图集。
外包钢加固法是混凝土加固技术中的一种，适用于使用上不允许增大混凝土截面尺寸，而又需要大幅度提高承载力的混凝土构件的加固，由于具有施工周期短，对生产生活影响小，设计简单的特点，在实际加固工程中得到广泛应用，具体可以细分为干式和湿式两类，其中又以湿法加固应用较多,一般用于加固钢筋混凝土梁，柱，桁架，腹杆等构件。
2．湿法外包钢技术原理和注意事项
2.1 湿法外包钢加固技术原理
结构湿法外包钢加固是建筑工程加固技术的一类，也即以乳胶水泥粘结或者以改性环氧树脂化学灌浆作为粘结剂，将钢板粘贴在钢筋混凝土结构的表面，能达到加固和增强原结构强度和刚度的目的。
2.2湿法外包钢加固主要适用条件
一般湿法外包钢技术可以用于轴心受压构件正截面加固，偏心受压构件正截面加固，受弯构件正截面加固以及受弯构件斜截面加固计算，主要适用于需大幅度提高截面承载力和抗震能力的混凝土梁、柱的加固。
2.3湿法外包钢加固的注意事项 湿法外包钢加固过程应注意如下事项：外包钢灌缝胶缝厚度的控制，宜在3~5mm；对于表面，包括混凝土表面和型钢表面，应涂抹高强度等级水泥砂浆防护层；型钢应优先考虑角钢，具体规则依据计算而定；作为缀板的扁钢和角钢焊接要求应严格遵循焊接规范要求；外包钢连接和锚固应可靠，简单；同时对于采用化学灌浆的外包型钢表面温度应该控制在小于60度，对于具有腐蚀性介质的环境应该对型钢构件采用相关防护措施。
3．某既有加固项目应用分析
3.1 项目概况
本项目为惠东县稔山镇办公楼惠州市某办公大楼，结构为六层框架结构，办公楼部分框架柱出现钢筋锈蚀影响正常使用，根据甲方要求，需要把原结构中受损柱进行受力分析加固补强计算。
3.2 具体计算分析
考虑到具体结构地处沿海旁，海水咸份对周围环境产生影响，重新设定环境类别为二类，因此考虑外包粘钢加固。
根据对既有建筑的鉴定报告提供的数据，利用电算分析工具进行模型分析，对照原设计图纸配筋，找出强度承载力不满足要求的构件，进行外包粘钢加固
具体柱构件加固结构设计施工，平面图及柱图如下图示：
计算依据：
《混凝土结构设计规范》GB50010-2002、《混凝土结构加固设计规范》GB50367-2006、
《建筑物结构安全性检测鉴定报告》，报告编号：D2008JD0458；
《钻芯法检测混凝土强度检测报告》，报告编号：F2008（02）0188
二、已知参数：-
1、轴心受压构件（矩形）正截面加固计算公式：
N≤0.9φ(fc0Ac0+ f'y0 A's0-+αa f'a A'a)
2、根据有关规范及依据可知：
根据鉴定报告，取一边柱代表计算，bXh=400X500,加固后BXH=500X600，L0/b=3600/500=7.2,按插入法φ=0.98，
计算过程，按《砼规范》，
Nmax=0.9φ(fcAc+ fy As)=3969K N
按《砼结构加固设计规范》
N≤0.9φ(fc0Ac0+ f'y0 A's0+αa f'a A'a)
A'a≥【N/（0.9φ）－fc0Ac0－ f'y0 A's0】/αa f'a=1.72cm2
实取4 L 80×5等边角钢，Aa=4*7.912=31.65cm2
4L80X5等边角钢满足。
1）第一层估算柱力为1500KN，（依报告）
按四级抗震等，轴压比=N/ fcAc
加固后每边加大100 mm，砼强度C20，
加大截面后轴压比=N/ fcA'c=0.52,符合规范要求。
2）第二层估算柱力为1200KN，（依报告）
按四级抗震等，轴压比=N/ fcAc
加固后每边加大100 mm，砼强度C20，
加大截面后轴压比=N/ fcA'c=0.42,符合规范要求。
3.3 注意事项：
1）对粘合面进行打磨时，必须漏出混凝土新面并保证表面平整，四周磨出小圆角，用钢丝刷刷毛，并用压缩空气吹净。
2）钢板粘结面必须进行除锈和粗糙处理，打磨粗糙度越大越好，打磨纹路和钢板受力方向垂直。
3）用丙酮或酒精清洗混凝土，钢板表面，要求混凝土，钢板表面无灰尘，无油污
4）将清洗后的钢板套入锚固螺栓，利用螺栓块调节钢板和混凝土之间的空隙，根据混凝土表面的平整情况，空隙厚度一般控制在2~3mm
5）将配置好的液态结构胶装入灌浆罐中，启动空压机和灌浆装置向钢板和混凝土表面之间的空腔内灌浆，灌胶压力为0.2mpa，压力应从低逐渐升高，达到0.2mpa时应保持稳定
6）混凝土表面应用角磨机打磨处理，清除表面松散物和油污，直至完全露出新面，钢板粘结面必须进行除锈和粗糙处理，直至完全出现金属光泽，并要求粗糙度越大越好，打磨纹路和钢板受力方向垂直。加固施工必须要有加固施工资质的单位
4．总结
外包粘钢加固技术从理论和工程实践上已经得到了比较完善的研究，但进行的具体的加固补强处理时必须要对既有建筑的材料进行鉴定，依据现有相关规范和电算结果对比原图纸找出有待补强构件，施工操作必须严格遵循施工顺序，严格依据施工图纸施工，加固完成后必须做好相关检验。本工程交付使用后证明加固效果良好，业主评价较高，满足了设计之前的各种要求，取得了较好的社会效益和经济效益，是一个成功的外包粘钢加固设计项目。
参考文献
【1】《混凝土结构设计规范》GB50010-2002 《混凝土结构加固设计规范》GB50367-2006
【2】《外包钢加固钢筋混凝土构件的计算及有限元分析》
篇9
[关键词] 甲状腺功能亢进；甲状腺激素；骨代谢相关细胞因子；骨代谢
[中图分类号] R581.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）08（c）-0052-03
Study on the changes of bone metabolism related cytokines and bone metabolic indexes of patients with hyperthyroidism
WU Ping
Department of Endocrinology, Qianjiang Central Hospital of Chongqing City, Chongqing 409000, China
[Abstract] Objective To study varying pattern of bone metabolism related cytokines and bone metabolic indexes of patients with hyperthyroidism. Methods 64 cases of patients with hyperthyroidism in our hospital from May 2010 to January 2011 were selected as the observation group, at the same time 64 healthy personnel were selected as the control group. The thyroid hormone, bone metabolism related cytokines and bone metabolic indexes between the two groups were detected and compared. Results Thyroid related hormones: FT4, FT3 and PTH of the observation group were all higher than those of the control group; TSH was lower than that of the control group (P < 0.05). Bone metabolism related cytokines: IL-6 of the observation group was higher than that of the control group; CT, TNF and IGF-Ⅱ were all significantly lower than those of the control group (P < 0.05). Bone metabolic indexes: Ca2+, AKP, BGP, I CTP and P I NP of the observation group were all higher than those of the control group; BMD was lower than that of the control group (P < 0.05). Conclusion Changes of bone metabolism related cytokines and bone metabolic indexes of patients with hyperthyroidism are obvious, and it should be paid enough attention during treatment.
[Key words] Hyperthyroidism; Thyroid hormone; Bone metabolism related cytokines; Bone metabolic
甲状腺功能亢进（甲亢）在临床上主要归属于自身免疫性疾病，患者表现为机体代谢紊乱，同时血清中存在的抗甲状腺激素可刺激甲状腺细胞分泌过量的甲状腺激素[1]。另外，甲亢患者机体除表现出甲状腺的症状体征及甲状腺激素的变化外，较多其他因子也可随之波动，对其进行研究可以进一步为甲亢的诊断治疗提供依据[1-2]。以往较多研究认为，甲状腺激素与骨成熟、发育有关[3-5]。本文笔者就甲亢患者骨代谢相关细胞因子及骨代谢指标的变化规律进行研究，现将研究结果报道如下：
1 资料与方法
篇10
子亡夫故悲情难抑
儿媳携孙出走雪上加霜
2012年6月15日，武汉石门峰陵园。陈曼华一手牵着6岁的孙子小宝，另一手捧着丈夫张洪的骨灰坛，站在儿子张心的墓前：“儿啊，你的小宝来看你了！妈来看你了！你爸怕你一个人太孤单，也来陪伴你了……”
丈夫亡故的“头七”还未满，陈曼华这天回汉口的家，忽然发现孙子小宝和儿媳伍霞都不见了。遍寻无果后，她得出结论：伍霞带着孙子跑了！她一下瘫在地上：“老头子啊，我这是造了什么孽啊……”
1969年，在武汉船舶厂工作的陈曼华不顾父母的强烈反对，嫁给远在大西北某军企工作的张洪。虽然两地分居，但陈曼华愿意。1972年，儿子张心出生。然而幸福的生活没维持多久，陈曼华的公婆相继暴病身亡，留下张洪4个未成年的妹妹。
丈夫远在大西北，28岁的陈曼华毅然扛起了照顾丈夫4个妹妹的重任。日子过得异常艰难，她就带着妹妹们去挖野菜，刨苕根，以补贴家用……1978年，几经周折，陈曼华离开武汉调到赤壁一家军工企业，张洪也从大西北调到赤壁山区工作。这样，一家人团圆了。岂料，1981年7月，张洪被诊断为“鼻咽部浆细胞恶性肿瘤”，经过两次手术，他暂且保命。此后，家里平静了几年。
2002年，陈曼华的独生子张心和通山女孩伍霞成家，几年后生下儿子小宝。可2012年，张心突然被查出也患了绝症――胃癌，且是晚期。一家五口，一夜之间出现两个绝症病人。悲痛之下，本已闯过癌魔夺命关口的张洪旧病复发，父子俩同时住进了湖北省人民医院。为了给儿子省下救命钱，张洪不愿再进行手术，只想把钱都花在救治儿子身上。然而，他还是没有挽回儿子的命。2012年寒凉的早春，陈曼华的独生子张心没能熬过美丽的春天，先一步离开早年患癌症的父亲而去。
黑发人送白发人的悲剧，让张洪身上的癌魔如同点燃导火索的定时炸弹。2012年6月，张洪也撒手人寰。临终前，他最为牵挂的是儿媳和孙子，他拉着陈曼华的手叮嘱：“一定要把他俩安顿好，把孙子的户口迁回武汉……”
丈夫去世后，陈曼华希望实现丈夫的遗愿，梦想把孙子的户口迁回武汉老家，唯一的办法就是媳妇改嫁到有武汉户口的男人，然后，孙子才能随母亲投亲靠友进武汉。可她没想到，在这个悲苦的当口，本该与自己相依为命的伍霞，却给这个风雨飘摇的家伤口上撒下一把盐，带着儿子人间蒸发了！
陈曼华狂躁不安，与儿媳的往事刺痛着她的心。痛定思痛，他心情渐渐平静下来，还是得顾全家庭大局，实现丈夫在世时一直纠结在心里的梦：把孙子的户口转到武汉。首要面临的是，做通儿媳伍霞的工作。
伍霞，1975年生于咸宁通山一个农家。她技校毕业，经媒人牵线，嫁给了张心。因公公常年治病，家庭并不宽裕，她和婆婆时常发生家庭纠纷。
2003年，张洪病情再度复发，情急之下，陈曼华不顾儿媳的强烈反对，将蒲圻一套小产权房卖了十多万元用于丈夫的急救。而这套房，是她承诺准备过户给儿媳的。房子没了，伍霞一气之下远走深圳打工。儿媳走后，陈曼华又当奶奶又做妈地养育小宝。2007年，陈曼华退休后，用两口子以及儿子多年积蓄在武汉买了一室一厅的二手房，全身心抚育这个孩子，并将孙子送进一家双语幼儿园上学。尽管如此，婆媳之间的房产硝烟并未散去。在伍霞看来，老公走了，公公也不在世了，家庭收入只有婆婆1000多元的退休金，这个家让伍霞彻底失望……
陈曼华的亲友们猜测，伍霞可能带着孩子回了咸宁山区娘家。如果贸然去那里找小宝，婆媳之间难免发生冲突。即使找到小宝，伍霞也绝不肯让婆婆把孩子带回武汉，弄不好，两个家庭为争夺孩子还会发生过激行为。亲友们于是劝说陈曼华一边冷处理，一边从查找伍霞的下落。
婆媳艰难的较量
宽恕的力量告慰亡者
漫无目标的等待，折磨着风烛残年的陈曼华，她几天不吃不喝。然而，在经受这么多年风风雨雨的洗劫之后，她就像拳击运动员一样，练就了抵御生死打击的“抗打力”。她要等，等着自己的宝贝孙子某一天从天而降。
这天，一个来电让她惊跳起来，竟是小宝的来电。原来，小宝果真被伍霞带回通山老家大山深处，但这个聪颖的孩子还记得奶奶家的电话。于是，趁外婆家没人，就拿起电话打通了奶奶家的电话：“奶奶，我在外婆家里……”可话还没完，电话那头被大人掐断了。得知孙子的下落，陈曼华泪流满面。“我的孙子还安然无恙，他好好的呢！”
此时，陈曼华哪里知道，丈夫死后，伍霞对这个家，尤其对婆婆已经失望，开始考虑自己的未来：自己还年轻，不可能守着一个孤老婆子一辈子，这个家又该何去何从？重重纠结下，她做出一个决定：偷偷将儿子雪藏老家，不让婆婆见面，也不让婆婆知道孙子的下落。她要以此窥探陈曼华下一步的打算，也冷静下来思考自己人生的出路……
然而，伍霞毕竟出生于一个淳朴的山民之家，父母从小就教育她与人为善。这个家的厄运让她心痛的同时，她也对婆婆很是同情：老年丧子丧夫的痛，该让她如何承受？
一个月过去，她焦躁起来，担心婆婆想孙子闹出人命。2012年7月的一天，她悄悄潜回武汉，偷偷打听到婆婆安然无恙后，就租房住在武汉打工。
儿媳的到来，很快被陈曼华的亲友打听到，陈曼华欢喜不已，于是几番周折打听到儿媳的住处，开始“谈判”。
婆媳见面，分外尴尬。好半天，陈曼华才颤抖着说：“为了小宝有个好的前途，你得在武汉重新组成家庭……”这话还没出口，伍霞就来气，以为婆婆不准她改嫁呢：“嫁不嫁人跟你婆婆没关系，还以为是旧社会，死了老公女人得守寡终生。”儿媳的话，让陈曼华一阵心痛：“我这也是为你们娘俩好。”陈曼华把话挑明了。“既然你想到媳妇重新成家能够有利于孙子，你当初怎么不为我考虑？做你张家媳妇这多年，为你张家生儿育女，我凭什么一走了之？”说到这里，伍霞提起当初住房也被公爹在世时为了治病卖了的事：“虽然产权不是我伍霞的，但是我是你张家媳妇呀，现在连房子都没有住的。”
陈曼华和媳妇伍霞一天一夜的谈判以无果告终。第二天，一夜未眠的陈曼华痛定思痛之后，打算先把孙子弄回武汉上学，暂时跟着自己吃住，其他的事情再商量。事实上，伍霞出走之后，心里虽然痛恨婆婆，但想到她看不见唯一血脉的那种失落，她还是准备去告诉婆婆将把孩子接回来。
两个人再次见面。在尴尬的一瞬间，还是陈曼华把自己的想法告诉了伍霞，正在托付熟人为媳妇物色对象。媳妇也告诉婆婆这就去老家接孩子。
2012年9月，小宝回武汉上小学。每天上下学，陈曼华接送。看着这对祖孙血脉相连，伍霞一路偷偷跟在后面。在伍霞看来，婆婆显然在和自己争夺孩子。
几天后，伍霞将儿子接到自己身边，再次向陈曼华提出当初房产之争的事情。陈曼华这才发现，儿媳其实还在纠结那套房子，然而，房子早卖了，她也没有钱补偿他们娘俩。左思右想后，陈曼华做出一个决定：为媳妇在武汉重新成个家，看能不能找一个有武汉户口的“上门女婿”，结婚后就跟自己住在这一室一厅的房子里。日后，再把孙子的户口投亲靠友转来武汉就行了。
这是一个大胆的决定。古往今来，只有母亲为女儿找婆家的，哪有婆婆为儿媳找婆家的？而且还准备搭上一套房子，虽然户主房产权还是自己，但是，“请神容易送神难”，一旦媳妇嫁人住在自己房子里不走，又容不下这个外人婆婆那就倒霉了。这个决定，陈曼华着实痛苦了好久，但想到孙子有归宿，自己受点委屈又有什么关系呢？而自己已风烛残年，给他们娘俩找个归属，这才是自己要做的！
年已70岁的陈曼华于是放下老脸，几经周折再次找到伍霞“谈判”。婆婆的到来，让伍霞警惕。丈夫没了，这个家对她全然没有意义，她一度对陈曼华不冷不热。
陈曼华说：“是我们张家对不起你，让你和孩子受苦了。心心就这样走了，留下你们孤儿寡母，我心里也不好受。若有来生，让他再弥补你吧。我也老了，活不了几年，你和孩子也是我最后的牵挂。你也很年轻，还要成家，所以，我想，帮你找个人家，我那房子总是你儿子的，这样我也放心走了……”
伍霞一直以为，婆婆的到来就是和自己抢孙子的。在老一辈观念里，血脉香火根深蒂固。然而，她没想到，陈曼华竟是来为自己找婆家而愿意提供住房。对婆婆的决定，她有点受宠若惊，然而，她又很快警觉。陈曼华似乎看出了她的顾虑，说：“你放心，你再婚后，小宝依然是你儿子，吃饭上学的钱还是我负担。我也不会拖累你……你要是不信，我们可以立下字据为证。”
燃烧的悲情走向重生
带着婆婆一起出嫁
又经过一个月的四处奔走，陈曼华的苦心终于得到回报。在中山公园里，伍霞约见陈曼华见面，跟在伍霞身边有一个陌生男子。伍霞说他叫王浩，在邮局工作，看见陈曼华到处为媳妇找个好婆家的信息后，与伍霞投缘，今天特地和伍霞来见一见婆婆。
陈曼华一看这王浩，感觉他比较老实，印象不错，首先想到，不会到了自己家里把我这老太婆折磨死吧，于是问王浩在哪里知道伍霞的信息的。原来，陈曼华几乎一有时间，她都去中山公园的自由恋爱的露天相亲场所，一边挂字条，一边坐在那里和爹爹婆婆天，这里大多数都是上辈人为下辈人代替找对象的地方，也有男女们自己来找对象，却假装帮别人查看信息的。因此，王浩告诉陈曼华，说陈师傅您放心好了，我早就注意到你，看见您为媳妇找男家，的确很好奇，于是多次侧面打听，所以，确认您是个好心的婆婆，这媳妇伍霞也许不错。这样，就和伍霞挂上钩了。
陈曼华一听，惊喜不已，原来这王浩很有心机啊，不过看人外貌不错，也有一份基本工作，起码不愁生活吧。她当场就说，蛮好的，你们能走到一起，我这个以前的婆婆感到高兴。陈曼华这时有点吞吞吐吐地说：“伍霞告诉过你我们的具体家庭背景没有啊？”
这时，伍霞开口了，说：“王浩知道了，只是有一个要求不知道你怎么样。”陈曼华立即问：“你说，是么事？”伍霞说：“房子是太小了，我们结婚住在一起很不方便，三代人一室一厅。”陈曼华点头，说：“挤哈子么办呢。”伍霞直接说了：“你能不能出去租一间房子单独住，我们给房租？”
伍霞这话一出口，陈曼华没想到，这不是还没有进门就赶走我这个老婆子吗！顿时，伤心的泪水差点落地，却狠狠地吞了回去，她好半天才回过神来，说：“好吧，希望你把小宝带好就是了，以后我住哪里再说吧。”这时，王浩一把拉着陈曼华的双手，激动地说：“谢谢您！伍霞开玩笑逗您呢。”